EVO视讯人小细胞肺癌细胞DMS114培养指南

一、细胞培养条件

细胞名称：人小细胞肺癌细胞DMS114

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：1640培养基 + 10% FBS + 1% P/S

传代方法：第一次建议以1:2比例进行传代

传代说明：建议每2天更换培养基。需使用无菌离心管收集培养基，以便于后续的对比实验。如效果不佳，可考虑直接购买EVO视讯的完全培养基。

二、细胞收货后处理

在将细胞培养至良好状态后，使用完全培养液灌满细胞瓶并密封，以优化运输细胞的效果。收到细胞时，需用75%酒精喷洒整个细胞瓶进行消毒，随后将其放置于超净台内进行无菌操作。接着将细胞瓶放入37℃、5% CO2培养箱，静置3-4小时以稳定细胞状态，然后进行后续处理。通过显微镜观察细胞生长情况，并拍摄不同倍数的照片（推荐40x, 100x, 200x各一张），前三天的照片为重要售后依据，若无照片默认状态良好。

三、细胞培养步骤

a. 细胞传代

当细胞汇合度未超过80%时，收集瓶内完全培养液至离心管中，保留5ml完全培养基于37℃、5% CO2培养箱中培养；若细胞密度超过80%，可进行传代。具体步骤如下：

1. 弃去培养上清，用不含钙、镁的PBS冲洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加约1-2ml的0.25%胰蛋白酶消化液，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化情况，若大部分细胞已变圆并开始脱落，迅速将其取回并轻轻敲击培养瓶，再加入至少5ml完全培养基以终止消化。
3. 轻柔吹打细胞以完全脱落，吸出悬液并转移至15ml离心管，在1000RPM下离心5分钟，弃去上清，添加1-2ml完全培养基重悬。
4. 按照1:2的比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后置于37℃、5% CO2培养箱中培养。

b. 细胞冻存

细胞生长至覆盖培养瓶的80%时，弃去培养液，用PBS清洗细胞一次。接着，添加约1ml的0.25%胰蛋白酶消化液，观察细胞回缩变圆后，加入5ml完全培养基以终止消化。轻轻吹打细胞，将悬液转移至15ml离心管中，并在1000RPM离心5分钟；弃去上清，加入1mlEVO视讯无血清冻存液（货号：C7001），混匀后转移至冻存管中。将冻存细胞直接放入-80℃冰箱。如果后续要转入液氮罐中，则需在-80℃冰箱存放至少24小时再转移。

c. 细胞复苏

从液氮中取出细胞冻存管（注意佩戴防护装备），快速置入37℃水浴中解冻，直至无结晶；随后用75%酒精擦拭冻存管外壁。将细胞转移至含5ml完全培养基的15ml离心管中，并在1000RPM下离心5分钟；弃去上清，添加5ml完全培养基重悬，然后接种至T25培养瓶，放于37℃、5% CO2培养箱中继续培养。次日更换为新鲜完全培养基。

四、注意事项

部分细胞在运输过程中可能由于贴壁不牢而发生脱落，此为正常现象。若脱落严重，可将培养液收集至离心管，1000RPM离心5分钟后，收集上清用于过渡培养。沉淀细胞加入1-2ml胰酶，轻轻吹打，并进行重悬，消化1-2分钟后加入5ml完全培养基终止反应。再进行离心，弃去上清后，添加1-2ml完全培养基重悬，并按1:2比例进行分瓶传代，补充新的完全培养基至每瓶5-8ml，最后放入37℃、5% CO2培养箱中培养。

五、售后条款

关于细胞出现问题的重发情况：

1. 若运输过程中遭遇细胞丢失、瓶身破损或培养液严重漏液，均可重发。
2. 若细胞污染，请在收到产品48小时内提供真实实验结果，经过核实后可重发。
3. 常温发货细胞如静置24小时后复苏后未存活，需提供真实清晰的细胞状态照片，以便重发。
4. 干冰冷冻发货的细胞若复苏后24小时内出现污染，也可重发。
5. 如细胞活性存疑，请在收到产品7天内提供真实实验结果，核实后可重发。
6. 收到细胞当天及后2、3天请提供照片，若3天内未告知，则视为产品合格。

额外注意，在4-7天内出现问题时，需要提供细胞收货前三天的照片，以及相关操作的详细步骤，经过技术人员判断后，决定是否由EVO视讯方承担责任重发。

关于不予重发的情况：

1. 如客户造成细胞污染，不予重发。
2. 如因不当操作导致细胞状态不佳，不予重发。
3. 如使用非本库推荐的培养体系导致细胞状态不佳，不予重发。
4. 如细胞状态不良且未提供细胞培养前3天照片，不予重发。
5. 如细胞培养处理过于复杂，不予重发。
6. 如收到细胞后在2天内未告知，不予重发。
7. 具体情况依约定而定。